ELISA實驗常見問題

異常：白板

結果描述：顯色步驟結束后酶標板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。

原因分析：試劑已過有效期，或不同試劑盒組分混用，檢查試劑的組分及批號，確認未過期以及所有組分均屬對應的試劑盒。

對策：不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用。

    整板的黃板現象可能是由于錯加其他試劑造成，如同時操作兩對半試劑時，測HbsAb板用于測HBsAg等；實驗前檢查試劑的組分及批號，確認所有組分均屬于對應的試劑盒。如盛標本的試管四周常有血痂，易脫落，應遠離酶標板。ELISA試劑盒超過有效期的產品可能會產生很弱的信號；試劑盒沒有按規定進行留存，受高溫影響；實驗前檢查試劑的組分及批號，確認試劑未過期。孵育溫度應控制在37-38℃，孵育時間嚴格按照說明書操作，保溫期內不宜多開門，以免影響保溫。花板，一般是由于臨床標本的收集、處理和留存方法不當造成，放置時間（自然放置 1~2h）及離心轉（3000r/min）、離心時間（15min）應引起注意。試劑、樣品用前未平衡至室溫從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應置室溫平衡，20分鐘左右。錯加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B 嚴格按說明書的步驟操作，加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致，以減少漏加現象。實驗結束后，陰陽性對照正常，質控正常，但臨床標本感覺顯色較弱，待測標本中可能不含強陽性標本，故結果可能是正常的，如有懷疑，可復檢標本加入疊氮鈉作為防腐劑，酶免實驗中的標本禁用疊氮鈉作為防腐劑，可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑，陰陽性對照正常，但質控、參考品或個別弱陽性標本未能檢出。

    不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用酶標對吸頭的污染以及對盛放顯色劑容器的污染都易造成黃板現象；避免試劑組分間的交叉污染，確保吸頭、容器的干凈，顯色劑在光照條件下放置過久，實驗前已變藍，顯色劑A、B未使用前避光留存，孵育溫度過高或孵育時間過長；孵育溫度應控制在 37-38℃，孵育時間嚴格按照說明書操作。標本在一周內使用的，可存于 2-8℃，如需長期留存，應置于-20℃以下留存。不要將ELISA試劑盒長時間置于常溫下，按使用規定儲藏。出現隨機性的花板、跳孔現象 樣品離心不*，反應孔內發生凝血或殘留細胞成分； 充分離心， 3000rpm6分鐘以上。儀器設定不正確，濾光片不匹配，重新設定酶標儀的參數，特別是檢查濾光片是否匹配，靈敏度過高、板底高、高背景 終止后，整板結果顯現均一的黃色或淡黃色；或陰陽性對照、質控正常，標本陰性標本，OD值過高。特別是洗滌時每孔未注滿洗液，易造成花板黃板現象，嚴格按說明書要求洗板。洗板及加樣過程中，酶標受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力，確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認配制洗液的容器已洗干凈。加樣時交叉污染； 加標本時盡量 避免交叉污染。