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上海遠慕生物科技有限公司

【結締組織染色】彈力纖維與膠原纖維染色實驗
點擊次數:151 更新時間:2024-08-15

實驗方法原理

彈力纖維由隨機交聯盤繞的一些肽鏈組成,含有豐富的二硫鍵糖蛋白成分,所以可稱為彈性蛋白。易與染色液中堿基結合,為了能夠更好地顯示彈力纖維和膠原纖維成分,選用維多利亞藍、麗春紅和ku味酸組合雙重染色方法。

實驗材料

石蠟組織切片

試劑、試劑盒

維多利亞藍 糊精 間ben二酚 蒸餾水 乙醇 三氯化鐵水溶液 濃鹽酸 ben酚二甲苯 中性樹膠

儀器、耗材

60 ℃恒溫箱 濾紙

實驗步驟

維多利亞藍染色液:維多利亞藍(Victoria blue2 g,糊精 0.5 g,間ben二酚 4 g,蒸餾水 200 ml。將上述物質混合后加熱煮沸,邊煮邊攪拌,約 5min。然后用另一容器取 30 三氯化鐵水溶液 25 ml,另行加熱煮沸后慢慢倒入上述混合液中,繼續煮沸 3 min,不斷攪拌溶液呈膠凍狀。去火,冷卻過濾,將濾紙上的殘渣連同濾紙一起放在 60℃ 恒溫箱中烤干。殘渣呈深藍色細顆粒狀粉末,再將其溶于 400 ml 70 乙醇液中。然后加濃鹽酸 4 ml 和苯ben酚 5 g,放置至成熟后使用。

 

 

1. 石蠟組織切片,常規脫蠟至水。

 

2. 切片入 70 乙醇中洗 2 min

 

3. 將切片浸入盛有維多利亞藍液中染 25 h

 

4. 直接入 95 乙醇中分色數秒鐘。

 

5. 用蒸餾水洗 2 min

 

6. 用麗春紅-ku味酸染色液滴染切片 3 min

 

7. 直接用無水乙醇沖洗多余染色液 2 次。

 

8. 二甲苯透明和中性樹膠封固。

注意事項

 

1. 維多利亞藍染色液可在室溫中存放較長時間,染色液浸染后倒回原處,可反復使用。

 

2. 95 乙醇分色后,立即浸入水中,可用顯微鏡觀察染色程度,如果較淺或較深,可再重復染色或分色。

其他

結果:彈力纖維呈藍綠色,膠原纖維呈紅色,背景呈黃色。

 

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